細胞前處理
發(fā)布時(shí)間：2014/5/27 15:12:18 瀏覽次數：7430 [字號：大 中 小] [關(guān)閉此頁(yè) 打印此頁(yè)]
養的是人臍靜脈內皮細胞，用25cm2的培養瓶養的，我們這里沒(méi)有超聲破碎儀和研磨器，之前有同學(xué)用反復凍融后再加裂解液的方法，結果不是很理想，剛才打電話(huà)咨詢(xún)咱們技術(shù)工程師他說(shuō)可以用勻漿器，我們的勻漿器是PRO200 Bio-Gen siries serial NO.是02-0473，一搬都是裂解組織的，不知道這種可以裂解細胞嗎？如果可以，基于我們實(shí)驗室條件有限，您建議我們怎么做實(shí)驗結果會(huì )好些呢？麻煩您把實(shí)驗的步驟發(fā)給我好嗎？我們剛剛做實(shí)驗，有些東西不夠了解，麻煩您講的詳細些。還有就是測SOD、CAT、GSH-PX、MDA時(shí)，細胞處理的過(guò)程都一樣嗎， 我還想再咨詢(xún)下，如果用這個(gè)勻漿器，細胞量少會(huì )不會(huì )貼到勻漿器的轉子上，也會(huì )影響結果呢？如果用化學(xué)裂解的方法呢？您建議用哪個(gè)廠(chǎng)家的裂解液呢，25cm2的培養瓶您建議一瓶加多少裂解液呢？
這個(gè)根據收集細胞數量，培養細胞的前處理：將培養細胞消化，1000～1500轉/分鐘離心10分鐘，棄上清，留下層細胞，每管加0.3～0.5ml生理鹽水或勻漿介質(zhì)制備成106/cm3細胞懸液，即106/ml，再進(jìn)行破碎。破碎細胞的方法有三種：①、用勻漿器勻漿。②、用超聲粉碎器粉碎。③、反復凍溶3次（第③種方法有時(shí)會(huì )影響酶活力）。制備好的細胞懸液一般不需要離心。細胞數量較大可以適當加大勻漿介質(zhì)量。至于老師考慮的會(huì )黏附到勻漿管上，這樣會(huì )有一定量的損失，總體不會(huì )干擾測定結果。裂解液考慮到成分可能干擾反應，所以不推薦使用，或者使用相對溫和的裂解液Triton X-100.建議最好采用物理方法破碎細胞
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